Антиоксидант препаратларнинг  заҳарланган каламуш жигари ферментларининг фаоллигига таъсири.

Л.Сейдалиева, M.Исабековa, Д.Бабаханова, П.Mирхамидовa.

Ҳозирги вақтда қишлоқ хўжалигида турли хил пестицидларни қўллаш кундан-кунга ортиб бормоқда. Лекин пестицидлар қўлланилаётган туманларда, экологик хавфсизлик талабларига риоя қилинмаслиги туфайли, аҳоли орасида касалланиш сони кўпайиб бораётгани кузатилган.(1,2)
            Одам ва ҳайвон организмига пестицидлар заҳарли таъсир қилганда антиоксидант препаратлар таъсир кучини аниқлаш муҳим аҳамият касб этади. Антиоксидантлар қаторига эркин радикаллар ҳосил бўлиши билан борадиган оксидланиш жараёнини тўхтата оладиган моддалар киради. (3)
	Изланишимизни амалга оширишдан мақсад, антиоксидант препарат қўллаш усули билан пестицидларни одам ва ҳайвон организмига кўрсатадиган салбий таъсирини бартараф қилишдан иборат. Тадқиқотларимиз олиниши осон ва арзон, таъсири кучли бўлган антиоксидантларни ўсимликлардан ажратиб олиб, унинг пестицидлар билан заҳарланиш туфайли юзага келган ўзгаришларнинг молекуляр механизмига таъсирини  ўрганишга  қаратилган.  Каратэ – синтетик  пиретроид  бўлиб, 
л-цианофеноксибензил  3 - ( 2 - хлоро 3,3,3  –  трифторпрол - 1 – этил) – 
2,2 – диметилциклопропанкарбоксилатдир. Бу препарат ламбада – цигалотрин деб ҳам аталиб, +5 °С дан то 35 °С гача бўлган шароитда 2 йилгача ўз турғунлик ҳолатини йўқотмайди. Бу пестицид инсектицид сифатида қишлоқ хўжалигида ҳашоротларга қарши курашишда қўлланилада. Тажрибаларимизда каратэнинг 1/10 Д50  дозадаги сувли суспензияси билан каламушларнинг бир гуруҳи per os заҳарлантирилиб, иккинчи гуруҳига бу пестицид юборилгандан сўнг 30 минут ўтгач 1мл 5% ли ўсимлик антиоксидант препаратининг экстракти per os йўли билан киритилди. Тажрибалар заҳарланишнинг 1,5,10,20,40 ва 50-кунлари олиб борилди. Аниқланишича, каламушлар жигар  митохондрияларида бўлгани каби микросомаларида ҳам заҳарланишдан сўнг 50 кун ичида ПОЛ жарёни қайта тикланмайди. Шунингдек, ўсимлик антиоксидант омили (ЎАО) бўлган шароитда ҳимояланган ҳайвонларда каратэнинг заҳарли хусусияти камайганлиги  намоён бўлди. Биз каратэ билан заҳарланган каламушлар жигари митохондриялари ва микросомаларида глутатионредуктаза (ГР) ферменти фаоллигини ўзгаришини ўрганишни мақсад қилиб қўйдик. 
		Жигар ҳужайралари антиоксидант тизимининг муҳим компоненти глутатионредуктаза жигар ҳужайраларида қайтарилган глутатионнинг нормал миқдорини таъминлашга жавобгар, унинг вазифаси кўпчилик ферментларни фаол конформацияда ушлаб туришдан иборат. Унинг кўпчилик қисми қайтарилган ҳолатда бўлиб, реактив ва заҳарли маҳсулотлар инактивациясида муҳим аҳамиятга эга.
	ГРнинг детоксикация (заҳарсизлантириш) жараёнидаги кўрсаткичини аниқлаш учун унинг фаоллиги интакт каламушлар жигари митохондриялари ва микросомаларида аниқланди. Бизнинг тадқиқот натижаларимизга кўра, митохондрияларда ГР фаоллиги 78,9 нмоль НАДФН/мин/мг оқсилга, микросомаларда эса 59,6 нмоль НАДФН/мин/мг оқсилга тенг бўлиб, бу кўрсатгичларни ферментнинг 100% фаоллиги деб қабул қилдик. Тадқиқотларимиз натижалари 1-жадвалда келтирилган бўлиб, унга кўра каратэ билан заҳарланган каламушлар жигари митохондрияларида ГР фаоллиги 5-кунга келиб, намунадаги каламушлар митохондрияларидаги ГР фаоллиги 246 % га юқори бўлган. ЎАО қўлланилганда у 110 %гагина ошган.  Заҳрлантириш содир бўлгандан кейин 30-50 кунларга келиб, ушбу кўрсатгич 5-кундаги кўрсатгичлардан кескин фарқ қилган ва 105 % ҳамда 104 % гача тушган. ЎАО қўлланилганда 30-50 кунларга келиб, фаоллик мос равишда 63 % ва 5 % гача пасайган. Бу эса, ЎАО таъсири натижасида каламушлар жигари митохондрияларида ГР фаоллиги норма билан тенглашишини кўрсатади. 
1-жадвал
Каламушлар жигаридан ажратиб олнган митохондриялардаги 
ГР фаоллиги (контрол каламушлар жигари митохондрияларидан ажратиб олинган ГР фаоллиги 100 % деб олинган; каламушлар жигари митохондрияларидаги ГР фаоллиги – 78,9 нмоль НАДФН/мин/мг оқсил)

Вариантлар	Муддат (кун)	
	5	30	50	
Каратэ	59,9±0,4	222,7±0,3	160,9±0,4	
Каратэ + ЎАО	261±0,5	167,7±0,2	82,8±0,5	

2-жадвал
Каламушлар жигаридан ажратиб олнган микросомаларидаги 
ГР фаоллиги (контрол  каламушлар жигари микросомаларидан ажратиб олинган ГР фаоллиги 10 % деб олинган; каламушлар жигари микросомаларидаги ГР фаоллиги – 59,6 нмоль НАДФН/мин/мг оқсил)

Вариантлар	Муддат (кун)	
	5	30	50	
Каратэ	574,7±0,3	137,1±0,4	120,9±0,3	
Каратэ + ЎАО	265,8±0,2	90,6±0,3	61,4±0,4	

	Шундай  натижалар каламушлар жигари ҳужайралари микросомаларида ҳам кузатилди (2-жадвал). Фермент фаоллиги 5-кунга келиб каратэ билан заҳарланган микросомаларда 290 %, ЎАО билан ҳимояланганларда эса контрол нисбатан – 163 % га тенг бўлган, яъни фарқ деярли 2-баробарни ташкил этди.
	30-кунга келиб, фермент фаоллиги заҳарлангандан ва ЎАО юборилгандан сўнг мос равишда 130 % ҳамда 29 % га тенг бўлган. 50-кунга келиб, каратэ юборилган микросомалардаги ГР фаоллиги 130 % гача, ЎАО юборилганда эса 17 % гача камайган. 
	Юқоридагилардан кўриниб турибдики, ГРнинг энг юқори фаоллиги каламушлар жигари микросомаларида заҳарланишнинг 5-куни, ЎАО билан ҳимояланган микросомаларда унинг нормага қадар пасайиши 50-кунларга келиб кузатилади. ЎАОнинг таъсир механизми, яна бир бор бизнинг каратэ таъсири натижасида бузилган метаболизм, заҳарланган каламушларга қараганда тезроқ тикланши ҳақидаги фикрларимизни тасдиқлайди. ЎАО таъсири натижасида заҳарланишнинг 50-кунига келиб фермент фаоллиги деярли тўлиқ нормаллашади.
	Тадқиқот натижалари кўрсатишича, заҳарланишдан сўнг ҳайвонлар жигари митохондриялари ва микросомаларида ГР фаоллиги ошди,бу натижалар эса антитоксик ҳимоя функциясини таъминловчи ГР ферментининг каратэ пестицидига нисбатан юқори таъсирчанликга эга эканлигини кўрсатди.
	Маълумки, ГР жигар ҳужайраларида қайтарилган глутатионнинг нормал миқдорини таъминлашга жавобгар бўлиб, у компенсатор характерга эга. Каратэ билан заҳарланган каламушлар жигари ҳужайралари митохондриялари ва микросомаларида ГР фаоллигининг ортиши, каратэ таъсирида жигарда қайтарилган глутатионлар миқдорининг ортиши билан боғлиқдир. Каратэ билан заҳарланган сўнг каламушларга ЎАО киритилиши ГР фаоллигининг тикланишига олиб келади. Бу эса жигар ҳужайраларида  эркин радикаллар ҳосил   бўлишини олдини олади.

Олиб борган изланишларимиз шуни кўрсатдики, пиретроид каратэ таъсирида каламуш жигарининг митохондрия ферментлари – Mg+2 – АТФ аза, цитохром – с-оксидазалар активлиги заҳарланишнинг дастлабки 1-10 кунлари кескин камайиб кетар экан.(3 ва 4 - жадваллар).
	Кейинчалик бу фермент активлиги аста-секин ошиб боришига қарамай, 50-кун давомида ҳам, ўз нормал активлигини тиклай олмас эканлиги кузатилди. Бундай ҳолат пиретроид каратэ, митохондрия мембраналари функциясини пасайтиргпнлигидан далолат беради. Mg+2 – АТФ аза, цитохром –с- оксидаза ферментлари мембранага боғлиқ ферментлар бўлгани учун, мембраналарда содир бўладиган кичик ўзгаришлар ҳам, уларнинг активлигига албатта таъсир кўрсатади. Биз қўллаётган АОП, ҳимоя вазифасини ўтаб, унинг таъсирида Mg+2 – АТФ аза, цитохром – с- оксидаза ферментлари активлигининг тикланишига ёрдам беради. 
	Пестицид билан заҳарланган каламушларга ярим соатдан сўнг юборилган АОП, ўз таъсир кучини дархол кўрсата бошлар экан. Захарланган каламушлар жигари митохондрия ферментлари, активлигининг дстлабки 10 кун ичида кузатилган кескин ингибирланиши, АОП таъсирида сезиларли даражада тиклана бошлайди. 
	Тажрибаларимиз шуни кўрсатадики, захарланишнинг 50- кунида Mg+2 – АТФ аза, цитохром-с- оксидаза ферментлари активлиги нормага нисбатан 20 ва 50 % гача ингибирланган бўлса, бу ҳолат, АОП таъсирида аста-секинлик билан тиклана бошлади.(3-4-жадваллар) Олинган натижалардан шу нарса маълум бўлдики, антиоксидант препарат таъсири остида Mg+2 – АТФ аза ферменти фаоллиги 95% га, цитохром – с – оксидазанинг фаоллиги эса 91% гача қайта тикланар экан.
3-жадвал
Каламуш  жигари митохондрияларида Mg+2 – АТФ аза активлиги
(100% активлик деб, контрол каламушларнинг жигари митохондриясидаги 4,5 мкмоль Р1/ мг оқсилга тенг активлик қабул қилинган )

Вариантлар 	Муддат (суткалар)	
	1	5	10	20	30	40	50	
Каратэ 	2,25
±0,03	2,5
±0,04	2,8
±0,02	3,1
±0,04	3,2
±0,03	3,6
±0,02	3,6
±0,02	
Каратэ + ЎАО	2,7
±0,02	2,9
±0,02	3,2
±0,03	3,4
±0,02	3,4
±0,04	3,8
±0,01	4,3
±0,04	

4-жадвал
Каламуш  жигари митохондрияларида цитохром-с-оксидаза активлиги
(ферментнинг 100% активлиги  деб, контрол каламушлар жигари митохондриясидаги 32,4 мкмоль/ мг оқсилга тенг активлик қабул қилинган)

Вариантлар 	Муддат (суткалар)	
	1	5	10	20	30	40	50	
Каратэ 	5,6
±0,03	8,9
±0,05	11,1
±0,04	12,3
±0,05	13,8
±0,03	15,0
±0,02	16,3
±0,03	
Каратэ + ЎАО	7,4
±0,04	10,9
±0,03	14,8
±0,06	17
±0,04	19,6
±0,02	22,3
±0,04	29,5
±0,04	

Олинган натижалар асосида, каратэ таъсирида мембраналарга боғлиқ ферментлар активлигининг сусайиши, мембраналар функциясининг ўзгариши оқибатидир, деб айтиш мумкин. Антиоксидант препаратнинг заҳарланган ҳайвон организмига киритилиши, мембрана функциясининг бузилишига сабаб бўлувчи метаболизм махсулотларининг, яъни турли оксидланган радикаллар сонинингкамайишига ва ташқарига тезроқ чиқиб кетишига сабаб бўлганлиги ҳисобига, мембрана ўз функциясини тиклай олади.
Шундай қилиб, каратэ гепатоцитларнинг ҳужайра компонентларида функционал ўзгаришларини юзага келтириб, организмнинг ҳимоя ва адаптация – мослашиши хусусиятларини сусайтиради. Биз томонимиздан ўрганилаётган антиоксидант омили  организмдаги функционал ўзгаришларни коррекциялашда қўлланилиши мумкин.